熒光顯微鏡通常需要在黑暗的環(huán)境下操作,才能對標(biāo)本的圖案進(jìn)行鑒別,該設(shè)備操作簡單,檢測快速,能夠很好的用于活體檢測,和微生物新城代謝的變化過程,使用熒光顯微鏡之前要詳細(xì)閱讀說明書,進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室后打開設(shè)備等待一定時間后再開始工作,這樣才能減少眼睛的傷害,下面是詳細(xì)介紹。
一、熒光顯微鏡的特點(diǎn)
1、它以紫外光或蘭紫單色光激發(fā)標(biāo)本的熒光。因紫外光是不可見光,故由標(biāo)本發(fā)出的熒光與背景反差很大。熒光顯微鏡通常是在黑暗的背景下觀察彩色圖象的,而普通顯微鏡是在亮的背景下觀察較暗的樣品的。熒光顯微鏡的對比度約為普通顯微鏡的一百倍,因此可觀察到用普通顯微鏡看不到的結(jié)構(gòu)和細(xì)節(jié)。
2、用肉眼或普通顯微鏡觀察經(jīng)熒光色素染色的樣品時,只可看到整個標(biāo)本僅以同一顏色著色。而用熒光顯微鏡觀察時,標(biāo)本會發(fā)出染色色素特有的熒光,呈現(xiàn)出標(biāo)本的彩色圖案,易于鑒別,可減輕眼睛的疲勞。
3、用熒光色素染色,方法簡單,制作標(biāo)本容易,有利于快速工作。
4、用于染色的熒光色素只要很低的濃度就能發(fā)出明亮的熒光,一般對機(jī)體無毒,故有利于活體觀察,如研究功能器官的變化過程和細(xì)微結(jié)構(gòu),某些代謝過程的變化等。
5、利用熒光還有助于分析物質(zhì)的化學(xué)成分。例如,組織中有些重要成分能與藥物起作用而發(fā)熒光,拒此可鑒定它們的存在或定位。
二、熒光顯微鏡使用注意事項(xiàng)
1、嚴(yán)格按照熒光顯微鏡說明書要求進(jìn)行操作,不要隨意改變程序。
2、熒光顯微鏡應(yīng)在暗室中進(jìn)行檢查。進(jìn)入暗室后,接上電源,點(diǎn)燃超高壓汞燈5~15min,待光源發(fā)出強(qiáng)光穩(wěn)定后,眼睛完全適應(yīng)暗室,再開始觀察標(biāo)本。
3、防止紫外線對眼睛的損害,在調(diào)整光源時應(yīng)戴上防護(hù)眼鏡。
4、檢查時間每次以1~2h為宜,超過90min,超高壓汞燈發(fā)光強(qiáng)度逐漸下降,熒光減弱;標(biāo)本受紫外線照射3~5min后,熒光也明顯減弱;所以,更多不得超過2~3h。
5、熒光顯微鏡光源壽命有限,標(biāo)本應(yīng)集中檢查,以節(jié)省時間,保護(hù)光源。天熱時,應(yīng)加電扇散熱降溫,新?lián)Q燈泡應(yīng)從開始就記錄使用時間。燈熄滅后欲再用時,須待燈泡充分冷卻后才能點(diǎn)燃。一天中應(yīng)避免數(shù)次點(diǎn)燃光源。
6、標(biāo)本染色后立即觀察,因時間久了熒光會逐漸減弱。若將標(biāo)本放在聚乙烯塑料袋中保存,可延緩熒光減弱時間,防止封裱劑蒸發(fā)。
7、熒光亮度的判斷標(biāo)準(zhǔn):一般分為四級,即“-”表示無或可見微弱熒光?!?”表示僅能見明確可見的熒光?!?+”表示可見有明亮的熒光。“+++”表示可見耀眼的熒光。