熒光是生物和分析顯微鏡中常用的物理現(xiàn)象之一，主要是因?yàn)樗哂徐`敏度高、特異性強(qiáng)的特點(diǎn)。當(dāng)高能量短波長(zhǎng)的光線激發(fā)某種物質(zhì)時(shí)，高能量的光子與物質(zhì)中電子碰撞，使得電子從基態(tài)躍遷到激發(fā)態(tài)。激發(fā)態(tài)的電子不穩(wěn)定，會(huì)回落到基態(tài)，這個(gè)過(guò)程中會(huì)消耗部分熱能，并發(fā)出新的光子。新的光子能量比激發(fā)的光子能量低，因此波長(zhǎng)更長(zhǎng)。這就是熒光效應(yīng)，也就是熒光顯微鏡看到的熒光圖像的原理。

熒光顯微鏡在使用時(shí)需要根據(jù)濾色片鏡組的激發(fā)光譜特性選擇合適的熒光染料，允許用戶決定單個(gè)分子種類的分布、數(shù)量及其在細(xì)胞內(nèi)的位置，可以實(shí)現(xiàn)共區(qū)域化和相互作用的研究，離子濃度以及觀察細(xì)胞內(nèi)間的胞吞和胞吐過(guò)程，可以成像亞分辨率結(jié)構(gòu)。今天咱們來(lái)了解下熒光顯微鏡中激光鏡可選擇的聚光器都有什么區(qū)別：

①明視野聚光器

 一般多用明視野聚光器，它具有聚光力強(qiáng)，使用方便，特別適于低、中倍放大的標(biāo)本觀察。

 ②暗視野聚光器

 暗視野聚光器在該設(shè)備中的應(yīng)用日益廣泛。因?yàn)榧ぐl(fā)光不直接進(jìn)入物鏡，因而除散射光外，激發(fā)光也不進(jìn)入目鏡，可以使用薄的激發(fā)濾板，增強(qiáng)激發(fā)光的強(qiáng)度，壓制濾板也可以很薄，因紫外光激發(fā)時(shí)，可用無(wú)色濾板（不透過(guò)紫外）而仍然產(chǎn)生黑暗的背景。從而增強(qiáng)了熒光圖像的亮度和反襯度，提高了圖像的質(zhì)量，觀察舒適，可能發(fā)現(xiàn)亮視野難以分辨的細(xì)微熒光顆粒。

 ③相差熒光聚光器

 相差聚光器與相差物鏡配合使用，可同時(shí)進(jìn)行相差和熒光聯(lián)合觀察，既能看到熒光圖像，又能看到相差圖像，有助于熒光的定位準(zhǔn)確。一般熒光觀察很少需要這種聚光器。