熒光顯微鏡根據(jù)襯度形成的機制,對散射吸收像可以有兩種成像方式:
明場成像法:選用單一透射束形成的衍射襯度像,亮背景上的暗圖形像,像清晰。物鏡光闌的孔越小,明場像的襯度越大。
暗場成像法:選用單一衍射束形成的衍射襯度像,暗背景上的亮圖形像,像有畸變。這種暗場成像法可以提高圖像的襯度。
熒光顯微鏡濾色片的選用:
濾色片是熒光顯微鏡的關鍵部件, 在熒光顯微鏡中按其功能可分為激發(fā)濾色片和截止濾色片兩類。激發(fā)濾色片的功能是從光源中分析出所需的特定光譜, 以激發(fā)標本產(chǎn)生熒光。截止濾色片的功能是僅把標本上發(fā)出的熒光透過成像, 而將其它光阻擋不參與成像, 一般激發(fā)濾色片安置在緊靠光源, 而截止濾色片在物鏡與目鏡之間。
目前使用較多的濾色片是色玻璃和干涉濾色片, 色玻璃大都屬寬波帶濾色片, 透過波段寬, 透過率隨厚度而降低, 價格相對低廉。由于色玻璃與空氣的界面上, 約有4%光線被反射掉, 玻片愈多, 光能損失愈大, 限制了它的使用性能。干涉濾色片的出現(xiàn), 可按需要制成能透過或截止一定波段的濾色片, 從而促使熒光顯微術(shù)的進展, 現(xiàn)代技術(shù)上已能對某波段的透射率或反射率進行控制。
熒光顯微鏡根據(jù)結(jié)構(gòu)組成部分可以分成兩種不同類型的熒光顯微鏡:
透射式熒光顯微鏡,它和普通光學顯微鏡類似,光源是從鏡座出發(fā)經(jīng)過聚光鏡到達樣品激發(fā)熒光后通過物鏡,到達目鏡。
落射式熒光顯微鏡,也是常見的熒光顯微鏡,它的光源是通過物鏡落到樣品上,激發(fā)熒光以后再發(fā)射回物鏡,到達目鏡。
透射式熒光顯微鏡和落射式熒光顯微鏡,它們的光源都要經(jīng)過激發(fā)濾色鏡過,濾掉一部分的可見光,但是它們的光源來源相反,透射式熒光顯微鏡光源來源于下方,而落射式熒光顯微鏡則是上方,具有分光鏡的功能,可以觀察透明和不透明的被檢物體,突破透射式熒光顯微鏡的局限性,因此隨著技術(shù)不斷進步,落射式熒光顯微鏡逐漸替代落射式熒光顯微鏡。